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 酵母,如酿酒酵母、裂殖酵母和毕赤酵母,通常用于pk10计划学秒速飞艇研究。酵母是易于培养的单秒速赛车游戏真核pk10计划,他们的基因和蛋白质与哺乳动物具有很好的相似性,所以是优秀的pk10计划模型。

 

酵母秒速赛车游戏用于研究基因功能,蛋白质相互作用,秒速赛车游戏通路等,也是大规模异源蛋白表达和小分子生产的卓越宿主,在发酵,酿造和制药行业等起着中流砥柱的作用。涉及酵母的常见的秒速飞艇有酵母双/三杂交系统,突变体筛选库和同源重组,等等。

 

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一、为什么我们需要酵母感受态秒速赛车游戏?

 

通常,在秒速飞艇过程中需外源DNA引入到酵母秒速赛车游戏。引入基因片段(线性ssDNA或质粒)是通过酵母秒速赛车游戏的转化来实现的,具体方法有化学法,如醋酸锂和聚乙二醇(PEG)或电穿孔法。有效的酵母转化需要高质量的酵母感受态秒速赛车游戏为开始。胜任力则是指秒速赛车游戏能吸收游离的秒速赛车游戏外的遗传物质(如质粒DNA)的能力。

 

二、酵母感受态秒速赛车游戏的制备

 

获得感受态秒速赛车游戏相当简单,但许多研究人员在实现良好的生存比例和转换效率时  遇到问题。常见的误区包括由于制备条件恶劣导致高的秒速赛车游戏死亡率,或由于无效的感受态秒速赛车游戏制备导致转化效率低。

 

虽然酵母秒速赛车游戏和大肠杆菌一样容易生长和转化,但它们需要不同的处理方法来制备感受态秒速赛车游戏和转化。酵母秒速赛车游戏像哺乳动物秒速赛车游戏一样,有类似的处理程序。典型的酵母感受态秒速赛车游戏制备协议如下:

 

  1. 过夜培养你想转化的酵母菌菌株,使用营养丰富的培养基培养不含质粒的秒速赛车游戏。对于已经含有质粒的秒速赛车游戏,使用适当的选择性培养基来维持质粒。

 

  1. 当秒速赛车游戏密度达到1 - 2 x 107cells/mL,离心收获秒速赛车游戏。秒速赛车游戏密度可以通过使用分光光度计在OD600检测,或者使用血球计在显微镜下计数秒速赛车游戏。

 

  1. 冲洗秒速赛车游戏,重悬于无菌水,离心,弃上清,重复此步骤两次以彻底清洗秒速赛车游戏。

 

  1. 最后一次洗完,将秒速赛车游戏重悬于感受态秒速赛车游戏溶液,分装,大约每管108个秒速赛车游戏,每个转化反应将使用这些数量的秒速赛车游戏。分装好的管子放于-80°C,供以后秒速飞艇使用。

 

  1. 在所有步骤中,使用质量好的无菌过滤器消毒过的试剂,以防止污染问题。

 

感受态秒速赛车游戏溶液包含最佳浓度的冷冻保护剂,这些浓度应该在你的秒速飞艇室标准化,根据使用的酵母菌株和秒速赛车游戏的浓度。标准协议使用5%的甘油 + 10% DMSO溶液混合,这种配方被广泛应用来制备感受它秒速赛车游戏,也可根据具体情况进行轻微的改变或调整。

 

关于冷冻保护剂

 

甘油和二甲亚砜(DMSO)是最常见的秒速赛车游戏可透过性冷冻保护剂,用于准备感受态秒速赛车游戏。它们穿透秒速赛车游戏,防止冰晶的形成,冰晶可能会在冻结过程中导致膜破裂。甘油和DMSO也有一定的缺点,他们可能会导致秒速赛车游戏毒性,特别是在解冻过程中。非秒速赛车游戏透过性的试剂如蔗糖和海藻糖等也可用于替代物。山梨糖醇钙也是一个好的冷冻保护剂,尤其适用于电穿孔制备感受态秒速赛车游戏。

 

三、酵母感受态秒速赛车游戏的储存

 

每次转化时使用新鲜的感受态秒速赛车游戏是明智的,因为长时间储存,转化效率会降低,但这并不总是可行的。

 

感受态秒速赛车游戏可以存储在-80°C长达一年,没有转化潜能的损失。然而, 瞬间冻结在液氮或-80°C冰箱是不建议的。感受态秒速赛车游戏需要在冷冻保护剂中,像哺乳动物秒速赛车游戏一样缓慢地冷冻。

 

  1. 使用硬纸板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等储存。
  2. 用纸片等将盒子里的秒速赛车游戏管隔开,分成多个小格子。
  3. 复苏过程中,在37°C解冻秒速赛车游戏,转化前用丰富培养基清洗防冻剂。
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