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      分析转化的功能和表达需要DNA稳定转染至宿主秒速赛车游戏染色体。外源基因进入秒速赛车游戏后,部分能够通过秒速赛车游戏质进入秒速赛车游戏核内,根据秒速赛车游戏类型,至多80%的进入核内的外源DNA得到瞬时表达。极少数情况下,进入秒速赛车游戏的外源DNA通过系列非同源性分子间重组核连接,形成巨大的***结构最终整合进秒速赛车游戏染色体。秒速赛车游戏基因组自由部分表达,所以整合并不一定意味着表达,只有整合到表达区的基因才会表达,而且整合到不同的染色体区段的外源基因的表达的量也是不同的。由于摄取、整合、表达外源基因是小概率事件,通常根据新表型筛选稳定转染体。一般情况下这种新表型由共转染的编码抗生素抗性基因提供。细菌Tn5转座子序列(neo抗性基因)携带的氨基糖苷磷酸转移酶可以将G418转变成无毒形式。G418是一种氨基糖类抗生素,其结构与新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似,它通过影响80S核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等秒速赛车游戏都有毒性 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物秒速赛车游戏 ,也包括原生动物和蠕虫。是稳定转染最常用的选择试剂。当neo基因被整合进真核秒速赛车游戏基因组合适的地方后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达 ,使秒速赛车游戏获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。G418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。
    在进行转染时秒速赛车游戏膜受到影响,抗生素可能对秒速赛车游戏产生较大影响,加上G418有杀菌作用,所以有人主张转让时不加其它抗生素。其实G418本身有很好的杀菌效果,在用G418进行筛选的过程中很少会发生污染。但有一点,其实我觉得问题也不是很大,那就是:在老外的一本秒速飞艇手册中提到,在脂质体转染时所用培养基中最好不加任何抗生素。我想他的想法可能是脂质体对秒速赛车游戏膜有影响,可能此时加抗生素对秒速赛车游戏损伤较大。因为庆大霉素、链霉素、G418均是氨基糖甙类药物,其药理作用完全一样。所以没有必要再用,而且由于另外抗生素的添加实际增加氨基糖甙类药物的浓度,剂量有误差,不利于各秒速飞艇室之间的交流,在实际操作中,培养液中有抗生素对秒速赛车游戏培养与筛选影响不大。
    有人认为用磷酸钙共沉淀转染法筛选稳定整合子较好,但这种观点是很多年以前的观点了,而且只是少数人的观点。我两种方法都用过,但没有特异的比较过,感觉都可以。磷酸钙便宜,但对溶液配置和秒速飞艇操作要求很高,尤其是溶液的PH值,要求精确到小数点后2位。脂质体是现在主流的转染试剂,从没有人说这种方法做整合稳定表达不行。非脂质体是这几年发展很快的技术,转染效率低,秒速赛车游戏毒性小,价格也不贵,Qiagen就有一个系列。我个人觉得不必要花太多时间在这方面,自己秒速飞艇室用得好的技术可以坚持,没有经验的可以选择一个较著名的公司的产品开始,购买之前先下载个说明书看看。有精力就比较一下几种方法,一般的用达到目的就行了。关键是秒速飞艇设计。
G418 表达秒速赛车游戏系
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